|
NÖRON KÜLTÜRÜ KURSU Tarih : 07.10.2008
Doç. Dr. Ahmet HACIMÜFTÜOĞLU Atatürk Üniversitesi Tıp Fakültesi Farmakoloji A.D.
Doç. Dr. Gürkan ÖZTÜRK Yüzüncü Yıl Üniversitesi Tıp Fakültesi Fizyoloji A.D.
Yrd. Doç. Dr. Abdülgani TATAR Atatürk Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Genetik A.D.
Nöron Kültürü Hakkında Bilgi: Tekli kültür kapları kullanılacaksa, poli-D-Lisin solusyonuyla kültür kapları (flasklar) deneyden 1 gün önce kaplanarak hazırlanır. Veya 24, 48, 96 kuyucuklu tabanı kaplanmış kültür kapları kullanılabilir. Deney günü Atatürk Üniversitesi Tıp Fakültesi Deneysel Araştırma Merkezi (ATADEM)’den temin edilecek olan yenidoğan sıçanlar bölümümüze getirilir. Bu sıçanların 3 günlükten küçük olmaları önemlidir. Denekler dekapite edildikten sonra istenen beyin veya omurilik bölgesi steril şartlarda çıkarılır. Bisturi uçları ile makro parçalama yapılır. HBSS + Tripsin EDTA ile 25-30 dakika muamele edilir. DNAse tip 1 ile 1-2 dakika muamele edilir. 3 dakika 800 RPM’de santrifüj edilir. Süpernatant atılır. Tortu kısmına HBSS+ FCS’li besiyerinde homojenize edilir. Kültür kaplarına ekilir. 24-48 saat sonra HBSS içine sitozin arabinosid konur. Flasklardaki medyumun yarısı çekip atılır ve yerine aynı oranda alexanlı HBSS konur. Son işlemden 48-72 saat sonra medyumların yarısı taze medyumla değiştirilir. Çalışma ilaçları çeşitli konsantrasyonlarda uygulanır. 16 saat beklenir. Sonrasında 2 yöntemle canlılık değerlendirilmesi yapılır. Tripan mavisi eklenerek invert mikroskop altında 10-15. dakikalar arasında canlı hücreler sayılarak canlılık yüzdesi değerlendirilir. Veya hücreler nötral kırmızı veya diğer hücre tipine göre değişen boyama yöntemleriyle boyanma sonrası spektrofotometre ile belirli dalga boylarında okunarak canlılık değerlendirmeleri yapılarak ilaçların toksisite ve koruyuculuğu hakkında yorum yapılabilir.
Kurs Programı: 07.10. 2008 Salı 08:30–09:00 AÇILIŞ VE KAYIT 09:00–10:00 Nöron hücre kültürü protokol bilgileri 10:00–10:15 Ara 10:15–12:00 İstenen nöron hücrelerinin cerrahi olarak çıkartımı, makroparçalama ve diğer protokoller 12:00–13:30 Öğlen Arası 13:30–15:30 Nöron kültür ekimi ve değerlendirmeler |